¿Biología Molecular?

• Generalizamos bajo este concepto a todos los reactivos cuyo principio metodológico es la reacción en Cadena de la Polimerasa o, PCR y, que usan como materia prima para el ensayo ácidos nucleicos (DNA o RNA) de algún microorganismo o de humano.

• Mediante tres reacciones térmicas, DNA de doble cadena, obtenido de humano o de algún microorganismo:

1) Separación en una sola cadena,
2) Unión (hibridación) a una pequeña cadena complementaria de DNA (primer o iniciador). Componente de un reactivo.
3) Amplificación para generar mas DNA, con la intervención de Taq polimerasa y dimeros de primer. Componentes de un reactivo.

• Al concluir el paso 3 se repite inmediatamente el proceso desde el paso 1, de 30 a 35 veces. Al finalizar, se obtienen millones de copias del material original.
• Puede saberse si hubo reacción con un ensayo final de electroforesis o ELISA o una técnica inmunoquímica.
• Cuando el material original es RNA, existe un paso inicial donde el RNA da origen a DNA para efectuar el ensayo

Componentes de una reacción PCR

• Los componentes para una reacción de PCR que se encuentran dentro de los reactivos que comercializamos son:
  • Primers o iniciadores
  • Taq polimerasa.
  • dNTPs (deoxinucleótidos). Son los “ladrillos” para la construcción de una nueva cadena completa de DNA, que será la que detectemos al final de la reacción de PCR.
  • Amortiguadores que contienen catalizadores de la reacción

Equipo y accesorios

• Todas las reacciones de PCR necesitan básicamente los mismos instrumentos y accesorios
  • Termociclador para tubos de 0.2 ml, de 96 posiciones.
  • Cámara de electroforesis y fuente de poder.
  • Fotómetro para cuantificar el DNA o RNA.
  • Ultra-microcentrífuga (15,000 rpm)
  • Centrífuga clínica.
  • Sistema de foto-documentación.
  • Lector y lavador de micro-placas ELISA. Para algunas metodologías (traslocaciones)
  • Pipetas automáticas de diferentes volúmenes.
  • Puntas desechables con filtro y sin filtro, adaptables a los volúmenes de las pipetas automáticas

Áreas de trabajo

• Para Biología Molecular se necesitan al menos dos áreas separadas, independientes dentro del laboratorio, para los procesos de:
  Preparación de la muestra y extracción de DNA .
  Amplificación y visualización
• Es deseable que exista una campana de flujo laminar vertical, pero puede sustituirse por una campana de bioseguridad. No se necesita para HLA.
  

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